微生物与食品微生物自考重点

临床执业医师考试必考知识点汇总 1.非细胞型：nm，活细胞内生长繁殖，病毒、朊粒。 原核细胞型：μm，细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌。 真核细胞型：mm，真菌。 2.细菌基本结构： 细胞壁：肽聚糖。 细胞膜：不含胆固醇，形成中介体（与呼吸有关）。 细胞质：含核糖体、质粒（核质以外的遗传物质，与致病性和耐药性有关）、胞质颗粒（异染颗粒，用于鉴定白喉棒状杆菌）。 核质：拟核。 特殊结构： 荚膜：抗吞噬（与侵袭力有关），黏附，抗损伤。 鞭毛：运动器官，有抗原性，与致病性有关。 菌毛：与致病性有关。性菌毛：F+/F-，噬菌体进入细菌内部。 芽孢：休眠形式，抗逆性强，与抵抗力有关，灭菌效果的指标。 3.革兰阳性菌：细胞壁肽聚糖：医学教育网l整理聚糖骨架（β-1，4糖苷键，溶菌酶水解）、四肽侧链、五肽交联桥，磷壁酸+，外膜、脂多糖-. 革兰阴性菌：细胞壁肽聚糖：聚糖骨架、四肽侧链，磷壁酸-，外膜、脂多糖+. 4.细菌以二分裂方式无性繁殖，时间称代时，迟缓期、对数期（用于研究）、稳定期（代谢产物产生）、衰亡期。 5.专性需氧菌：结核分枝杆菌，铜绿假单胞菌。 微需氧菌：空肠弯曲菌，幽门螺杆菌。 兼性需氧菌：大多数。 专性厌氧菌：破伤风梭菌，脆弱类杆菌。 6.细菌素可作为流行病学调查时细菌分型的依据。 7.灭菌：所有微生物。 消毒：病原非生物，对芽孢无效。 8.高温（热力灭菌法）最常用。以湿热灭菌法最常用，效果好。 巴氏消毒法用于牛奶、酒类。 高压蒸汽灭菌法：1个大气压、121.3℃，15～20min，效果最好，包括芽孢，但不能杀朊粒。 紫外线：形成二聚体。 9.引起菌群失调症的原因：正常的菌群的组成和数量明显改变。 引起菌群失调的最主要原因：滥用抗生素。 10.毒力：侵袭力（黏附素、荚膜、侵袭素、侵袭性酶类、细菌生物被膜）+毒素（内、外）。 外毒素：G+，活菌分泌，蛋白质，不稳定，毒性、抗原性强，甲醛处理形成类毒素。 内毒素：G-，细胞壁组分，细菌崩解后释出，脂多糖，毒性、抗原性弱，无选择性，耐热，甲醛处理不形成类毒素。

对人类来说，生物太重要了，人们的生活处处离不开生物。以下是我为您整理的关于高二生物下册微生物的培养与应用教学设计的相关资料，供您阅读。

高二生物下册微生物的培养与应用知识重点

【专题目标】

1.掌握培养基、消毒灭菌等有关微生物培养的基础知识，

2.掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术，

3.运用相关技术解决生产生活中有关微生物计数、微生物的分离与培养等实际问题。

【技术要项】

1.培养基的制备

2.高压蒸汽灭菌和干热灭菌

3.倒平板操作

4.平板划线操作和稀释涂布平板法

5.应用选择培养基分离某种特定的微生物

课题1 微生物的实验室培养

1.课标

了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。

2.重点难点

无菌技术的操作。

3.课题背景分析

培养微生物的要领，是为所需要的微生物提供良好的生存环境，同时阻止或抑制其他微生物的生长。

4.基础知识

(1)培养基

1.培养基的用途和种类，指出培养基可分为液体和固体两大类;

2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方;

3.尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。

(2)无菌技术

1.无菌技术的概念;

2.消毒与灭菌的概念及两者的区别;

3.常用的消毒与灭菌的方法，接种环灼烧灭菌的方法。

5.实验安排及注意事项

实验后，所有用过的培养基、培养液等都需要统一进行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则将会造成环境污染。

6.课题成果评价

(1)培养基的制作是否合格

如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。

(2)接种操作是否符合无菌要求

如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的;如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。

(3)是否进行了及时细致的观察与记录

培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。

7.答案和提示

1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的?

答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。

(1) 培养细菌用的培养基与培养皿

(2) 玻棒、试管、烧瓶和吸管

(3) 实验操作者的双手

答：(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。

(二)倒平板操作的讨论

1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?

可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。

2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?

通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置?

平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?

空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。

(三)平板划线操作的讨论

1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗?为什么?

操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

2.以免接种环温度太高，杀死菌种。

3.划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

(四)涂布平板操作的讨论

涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作?

应从操作的各个细节保证无菌。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围;等等。

(五)练习

1.可以从微生物生长需要哪些条件的角度来思考。例如，微生物的生长需要水、空气、适宜的温度，食品保存可以通过保持干燥、真空的条件，以及冷藏等方法来阻止微生物的生长。

2.可以从这三种培养技术的原理、操作步骤等方面分别进行总结归纳。例如，这三种培养技术都需要为培养物提供充足的营养，但无土栽培技术的操作并不需要保证无菌的条件，而其他两种技术都要求严格的无菌条件。

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、课题目标

研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

二、课题重点与难点

课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

课题难点：对分解尿素的细菌的计数。

三、课题背景分析

教材从尿素在农业上的重要用途切入，介绍了土壤中能分解尿素的细菌，进而说明这种细菌的作用是能够合成分解尿素的酶。教学中，教师可以联系生产生活实际，使学生对尿素以及分解尿素的细菌形成一定的感性认识。教材还简要地介绍了尿素的发现过程以及尿素合成的历史，这些都是科学、技术、社会教育的丰富素材。最后，教材明确指出了本课题的目的，有助于学生准确把握课题的方向。

四、研究思路

(一)筛选菌株

微生物的选择培养，是指利用培养基的组成使适宜生长的特定微生物得到较快繁殖的技术，也称为微生物的选择培养。在本课题提供的选择培养基的配方中，尿素是培养基中的惟一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进 一步的验证。

(二)统计菌落数目

统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在 30～300的平板进行计数。

教材中用楷体字编排的实例是为了说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。

(三)设置对照

A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A 无误;如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。

五、实验案例

土壤中某样品细菌的分离与计数

实验的具体操作步骤如下。

1.土壤取样

从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。

2.制备培养基

准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备8个灭菌的试管和1个灭菌的移液管。

3.微生物的培养与观察

参考课本中图2-7的实验流程示意图，将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(锥形瓶体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有9 mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。

将涂布好的培养皿放在30 ℃温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。

挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否产生如课本中图2-10的颜色反应。

4.细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

六、课题成果评价

(一)培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落

对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。

(二)样品的稀释操作是否成功

如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。

(三)重复组的结果是否一致

如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，教师需要引导学生一起分析产生差异的原因。

七、答案和提示

(一)旁栏思考题

1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?

答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。

2.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度?测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗?

答：这是因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样 本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。

(二)练习

微生物学是一门研究微小生物体的学科。该学科的研究对象包括单细胞的、多细胞的(细胞集落)或无细胞的(缺乏细胞)的生物。微生物学包含许多子学科，包括病毒学、寄生虫学、真菌学和细菌学。真核微生物，如真菌和原生生物，拥有膜覆盖的细胞器，而原核生物——即所有微生物包括细菌和古菌——通常没有细胞器。[1][2]微生物学家主要依赖于培养、染色和显微镜检查等传统方法鉴定微生物。然而，在普通环境中存在的微生物中，只有不到1%可以用目前的方法进行分离培养和坚定。[3]对于很多不可培养的微生物，微生物学家通常依赖分子生物学工具，如基于DNA序列的鉴定，例如细菌鉴定利用16s rRNA基因序列。病毒被模糊地鉴定为生物[4]，其主要由核酸（DNA 或者RNA）以及外面包裹的蛋白质衣壳组成。如此简单的结构使得病毒不能自我复制和代谢，需要依赖于宿主细胞内的能量、物质和其他细胞器完成复制。值得注意的是，朊病毒则不是微生物，是一类具有“感染性的蛋白质”。在发现微生物几个世纪之前，人们就预测有看不见的微小生命存在。例如，例如印度的耆那教徒和古罗马的马库斯·特伦提乌斯·瓦罗（Marcus Terentius Varro）。第一次记录的显微镜观察是霉菌的子实体，是由罗伯特·胡克（Robert Hooke）发现的。据考证，耶稣会牧师阿塔纳斯·珂雪（Athanasius Kircher）很可能是第一个看到微生物的人，他于1658年提到在牛奶和腐烂物质中观察到的微生物。安东尼·范·列文虎克（Antonie van Leeuwenhoek）被认为是微生物学之父，他在1676年使用自己设计的简单的显微镜观察到微生物。19世纪，路易·巴斯德（Louis Pasteur）和罗伯特·科赫（Robert Koch）在医学微生物学研究中逐步发展了科学的微生物学。虽然一些微生物各种人类疾病相关联，但是许多微生物也参与许多有益的过程，例如工业发酵(例如生产酒精、醋和乳制品)、抗生素的生产，并充当将DNA转移到复杂生物体如植物和动物的分子载体。科学家还利用他们对微生物的了解来生产生物技术上重要的酶，如 Taq聚合酶，报告基因，用于其他遗传系统和新的分子生物学技术，如酵母双杂交系统。细菌可用于工业生产氨基酸。谷氨酸棒状杆菌是最重要的细菌之一，每年生产200多万吨氨基酸，主要是L-谷氨酸盐和L-赖氨酸。[23]由于一些细菌具有合成抗生素的能力，它们被用于医学目的，例如链霉菌制备氨基糖苷类抗生素。[24]利用酵母进行酿造的发酵罐 啤酒许多生物聚合物如多糖、聚酯和聚酰胺是由微生物产生的。微生物用于生物技术生产具有适合高价值医学应用的定制特性的生物聚合物，例如组织工程学和药物输送。微生物还用于生物合成黄原胶、藻酸盐、纤维素、藻青素聚(γ-谷氨酸)、果聚糖、透明质酸、有机酸、寡糖、多糖和聚羟基脂肪酸酯等。[25]在土壤、沉积物和海洋环境中，微生物帮助生物降解或者生物修复生活、农业和工业废物以及地下污染。每种微生物降解有毒废物的能力取决于每一种污染物的性质。因为污染点通常有多种污染物类型，最有效的方法是微生物生物降解是使用细菌和真菌物种和菌株的混合物，使每种特定于生物降解一种或多种污染物。[26]共生微生物群落能给人类和动物健康带来益处，包括帮助消化、产生有益的维生素和氨基酸以及帮助抑制病其他原微生物。食用发酵食品、益生菌(对消化系统有潜在益处的细菌)或益生元(用于促进益生菌微生物生长的物质)也可能会实现这些益处。[27][28]微生物群落如何影响人类和动物健康以及影响微生物群落的方法是研究的活跃领域。[29]研究表明微生物可用于治疗癌症。各种非致病性梭菌菌株可以在实体肿瘤中渗透和复制。梭菌载体可以用于肿瘤给药，它们递送治疗蛋白质的潜力已经在各种临床前模型中得到证明

南方医科大学自考的实践考试就是通过实践操作运用医生的设备仪器，通过理论和实践操作的考试。